A quimioluminescência aprimorada (ECL) é o método principal para detectar Western blots, pois, além de conveniente, fornece maior sensibilidade. Pensando nisso, a nossa parceira Cyanagen desenvolveu a WESTAR, uma linha de substratos ECL para aplicação Western blotting. Cada substrato WESTAR está no topo de seu respectivo segmento de mercado em termos da relação desempenho/preço. O WESTAR SUPERNOVA é um substrato ultrassensível com excelente intensidade de sinal e saída de luz estável no nível de baixo fentograma.

Figura 1: Detecção Western blotting de HDAC-1 em lisado de células HeLa com WESTAR SUPERNOVA e outros reagentes quimioluminescentes na mesma faixa de sensibilidade. Amostra: série de dupla diluição de lisado de HeLa whole cell (abcam®?) de 2,5?g a 0,039?g de proteína total. Membrana: Pacotes de Transferência de Mininitrocelulose Trans-Blot®? Turbo™? (Bio-Rad). Bloqueio: 2% ECL™? Blocking Agent (GE Healthcare) em PBS-T. Anticorpo primário: Coelho anti-HDAC-1 Humano (abcam®?) 1:15000. Anticorpo secundário: IgG de cabra anti-coelho HRP (2mg/ml) (abcam®?) 1:300000. Os substratos ECL utilizados são: A) WESTAR SUPERNOVA (Cyanagen); B) Clarity Max™? (Bio-Rad); C) Amersham™? ECL Select™? (GE-Healthcare): D) SuperSignal™? West Femto (Thermo Scientific™?). Imagem: ImageQuant™? LAS 4000 (GE Healthcare). Tempo de exposição: 120 segundos.